通過結(jié)果的生物學(xué)意義對結(jié)果質(zhì)量進(jìn)行評估?當(dāng)所有具生物學(xué)意義的參數(shù)在測試中表現(xiàn)出較小的可變性時(shí)則方法學(xué)可變性亦較低方法學(xué)可變性低則結(jié)果質(zhì)量就高。CASA系統(tǒng)獲得的數(shù)值與直觀評估獲得的數(shù)值進(jìn)行分析和比較在精子數(shù)量和綜合運(yùn)動性上具有較好的相關(guān)性而·131·中國優(yōu)生與遺傳雜志2002第10卷第6期DOI:10.13404/j.cnki.cjbhh.2002.06.091在前向運(yùn)動精子百分率上的相關(guān)性較低]。Holt等報(bào)道了在常規(guī)實(shí)驗(yàn)條件下采用五種不同的CASA系統(tǒng)對**參數(shù)值進(jìn)行比較,其結(jié)果為:采用同一個測定池由不同的操作者測定**參數(shù);變異系數(shù)(CV)是29%?活動精子比率的CV為24%?平均路徑速度(VAP)的CV為43?85%。作者們指出該分析結(jié)果不應(yīng)看作是不同CASA系統(tǒng)間的工作情況的比較?實(shí)際上它揭示了操作者的錯誤是差異的主要來源。目前有待于尋找進(jìn)一步的標(biāo)準(zhǔn)來評估CASA變量的結(jié)果質(zhì)量。精子***的生物學(xué)功能是使卵細(xì)胞授精?因此用夫婦中的授精結(jié)果來考察精子運(yùn)動性是合理的?只有在該基礎(chǔ)上能夠確定活動性參數(shù)的重要性。輔助生殖技術(shù)(授精I(xiàn)VF)的發(fā)展使檢測精子質(zhì)量與各參數(shù)間的關(guān)系的比較成為可能;同樣可以驗(yàn)證CASA測定結(jié)果與精子真實(shí)質(zhì)量間的相關(guān)性有利于CASA結(jié)果質(zhì)量的提高。男性精液檢測主要依賴計(jì)算機(jī)輔助精子分析儀(computer assistant semen analyses,CASA)。上海山羊精子分析BCF
HamiltonThorne精子分析儀IVOSⅠ與IVOSⅡ一致性比對分析根據(jù)質(zhì)量控制的要求,對新精子分析系統(tǒng)進(jìn)行性能驗(yàn)證后,應(yīng)與舊系統(tǒng)進(jìn)行一致性評價(jià),從而保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。方法:選用原有HamiltonThorne精子分析儀IVOSⅠ為參比儀器,新購儀器IVOSⅡ?yàn)閷?shí)驗(yàn)儀器,對精子分析系統(tǒng)的主要參數(shù)(精子濃度、前向運(yùn)動精子百分率、總活力)進(jìn)行分析比對。結(jié)果:兩臺儀器的方法內(nèi)和方法間離群值檢驗(yàn)、偏倚圖和散點(diǎn)圖的線性關(guān)系和離群值檢測所有參數(shù)均能符合比對要求,檢測結(jié)果具有相關(guān)性;對實(shí)驗(yàn)儀器的檢測結(jié)果適合范圍的檢驗(yàn),當(dāng)其精子濃度r=0.988,前向運(yùn)動精子百分率r=0.975,總活力r=0.981,r均≥0.975,表明取值范圍合適;對預(yù)期偏倚(Bc)的接受性評價(jià)表明當(dāng)精子濃度在12×10~6/ml,允許總誤差(TEa)為6.67%;當(dāng)前向運(yùn)動精子百分率<31%,TEa為2.34%,兩項(xiàng)檢測的Bc上限<1/2允許誤差(Ea),實(shí)驗(yàn)儀器經(jīng)比對分析顯示符合質(zhì)控要求。結(jié)論:通過比對分析,得出兩臺精子分析系統(tǒng)的主要參數(shù)(精子濃度、前向運(yùn)動精子百分率、總活力)結(jié)果具有可比性,檢測結(jié)果一致,可同時(shí)用于臨床標(biāo)本的檢測。南京濃度精子分析負(fù)相差Hamilton Thorne自動精子分析儀具有高精度、高效率和自動化的優(yōu)點(diǎn)。
通過比較進(jìn)行質(zhì)量評估1.室內(nèi)比較是采用同一個標(biāo)本在同一參數(shù)下?經(jīng)CASA多次測定后?應(yīng)用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法對測得數(shù)值進(jìn)行比較。在男科實(shí)驗(yàn)室中對CASA系統(tǒng)的質(zhì)量控制通常使用影像磁帶或完全相同的凍存**標(biāo)本進(jìn)行日間比較。當(dāng)室內(nèi)比較作為結(jié)果質(zhì)量的一種評估時(shí)?計(jì)算機(jī)中數(shù)值的在線獲得是極具優(yōu)勢的。2.室間比較要求標(biāo)本向其他幾個實(shí)驗(yàn)室運(yùn)送文獻(xiàn)中的一些報(bào)道闡述了該方面的經(jīng)驗(yàn)但是運(yùn)動精子是不能在不受限制的條件下運(yùn)輸?shù)膶⑵渲糜谝旱羞\(yùn)送需進(jìn)一步考慮更多的因素(解凍技術(shù)、標(biāo)本的處理等)這些因素會影響活動力參數(shù);到目前為止室間比較的研究還未見滿意報(bào)道;Jorgensen等進(jìn)行了研究嘗試克服實(shí)驗(yàn)室間運(yùn)送解凍標(biāo)本的困難其研究方式是:邀請四個實(shí)驗(yàn)室的實(shí)驗(yàn)人員攜帶各自的儀器到同一個地點(diǎn)以各自通常采用的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行精子評估但未見明確的結(jié)論。3.對于精子活力測定CASA系統(tǒng)的測定與直觀評估的比較有文獻(xiàn)進(jìn)行了報(bào)道但結(jié)果并不相同。認(rèn)為直觀評估揭示標(biāo)準(zhǔn)數(shù)值且其差異是由CASA系統(tǒng)的錯誤引起的該觀點(diǎn)是不正確的;無論從理論上還是實(shí)踐中CASA數(shù)值比直觀評估所獲得的數(shù)值更接近于真值;對直線前進(jìn)的精子比例而言這一點(diǎn)是非常正確的。
全自動的IVOS可以提供**快的分析速度以及高質(zhì)量數(shù)據(jù)輸出??梢允褂靡淮涡缘暮涂芍貜?fù)的載玻片,深度從10um~100um。每次分析捕捉100幀圖像,掃描速度每秒60幀。**的軟件升級。IVOS能提供:精確、客觀、具有重復(fù)性的結(jié)果。高速分析,在60Hz下半秒掃描30幀,為實(shí)驗(yàn)室節(jié)省成本。[1]主要功能IVOS自動精子活動、濃度、形態(tài)分析系統(tǒng)。HamiltonThorne的CASA系統(tǒng)適用于臨床、研究實(shí)驗(yàn)室、動物繁殖基地、水產(chǎn)業(yè)、制藥公司等各種領(lǐng)域,成為了精液分析業(yè)的金標(biāo)準(zhǔn)。可以應(yīng)用于包括人類、公牛、馬、野豬、狗、兔子、老鼠、綿羊、山羊、魚以及各種瀕危動物。在TOXIVOS上有**的大鼠精液分析軟件。Hamilton Thorne精子分析儀具有高度的可靠性和穩(wěn)定性,能夠長時(shí)間穩(wěn)定運(yùn)行,保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。
精子分析儀是計(jì)算機(jī)技術(shù)和圖像處理技術(shù)結(jié)合的**分析儀器設(shè)備,通過顯微鏡下攝像和計(jì)算機(jī)快速分析多個視野內(nèi)精子的運(yùn)行軌跡,客觀記錄了精子的密度、活動力、活動率和存活率等各項(xiàng)參數(shù)。計(jì)算機(jī)輔助**分析儀由硬件系統(tǒng)和軟件系統(tǒng)組成。硬件系統(tǒng)主要由顯微攝像系統(tǒng)、圖像采集系統(tǒng)、恒溫系統(tǒng)、計(jì)算機(jī)處理系統(tǒng)等四大系統(tǒng)構(gòu)成。此外,儀器一般配有**樣品盒,以確保單層取樣[1]。1.顯微攝像系統(tǒng):由顯微鏡及CCD組成??梢詫?biāo)本信號通過顯微放大由CCD傳輸?shù)接?jì)算機(jī)2.圖像采集系統(tǒng):由圖像卡構(gòu)成,其功能是對CCD信號進(jìn)行抓拍、識別、預(yù)處理后,將成熟信號輸送到計(jì)算機(jī)。3.恒溫系統(tǒng):由加溫和保溫設(shè)備組成。加溫是通過熱吹風(fēng)機(jī)不斷將適宜的溫度熱風(fēng)鼓入封閉保溫罩內(nèi),提供穩(wěn)定、可靠的檢查環(huán)境。4.計(jì)算機(jī)系統(tǒng):對圖像信號進(jìn)行***系統(tǒng)的加工處理,對獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行輸出和存儲的設(shè)備。軟件系統(tǒng)采用**的精子質(zhì)量分析軟件,利用現(xiàn)代化的計(jì)算機(jī)識別技術(shù)和圖像處理技術(shù),對精子的動靜態(tài)特征進(jìn)行***的量化分析,對精子的密度、活力、活率、運(yùn)動軌跡等特征進(jìn)行量的檢測分析全自動精子分析儀嚴(yán)格按照世界衛(wèi)生組織(WHO)和KRUGER標(biāo)準(zhǔn),并通過ISO9001認(rèn)證。香港牛精子分析
CASA系統(tǒng)可以給出多種精子運(yùn)動狀態(tài)的參數(shù),這些參數(shù)能夠幫助更有效地了解精子的運(yùn)動特性。上海山羊精子分析BCF
精子分析儀使用注意事項(xiàng)1.樣品制備是CASA取得高質(zhì)量檢查結(jié)果的關(guān)鍵。CASA采用深度為10um樣品池,能保證精子在單層界面內(nèi)自由運(yùn)動。取樣分析前標(biāo)本必須充分混勻,用微量取液器取5~7ul**加入樣品池中,用0.5mm厚皿蓋片蓋緊。2.不潔凈的計(jì)數(shù)池可影響精子的活力,尤其影響灰度CASA精子計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。3.精子樣品密度過大時(shí),造成圖像處理上的粘連,無法分析每個精子的運(yùn)動特性。**中所含精子太少時(shí),需增加檢查視野數(shù)量或者使用低倍物鏡觀察,以提高樣品檢出率。上海山羊精子分析BCF