除了His標(biāo)簽和GST標(biāo)簽,還有多種融合伴侶技術(shù)可以用于提高蛋白的表達(dá)和純度,包括但不限于以下幾種:1.Flag標(biāo)簽:Flag是一個(gè)八肽序列(DYKDDDDK),可以通過(guò)抗Flag標(biāo)簽的抗體進(jìn)行免疫沉淀或西方印跡分析,有助于提高蛋白的純度。2.Fc融合蛋白:Fc標(biāo)簽是免疫球蛋白的恒定區(qū),可以提高蛋白在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的溶解性和穩(wěn)定性,并且可以通過(guò)蛋白A親和層析進(jìn)行純化。3.人血清白蛋白(HSA):HSA作為融合伴侶可以提高蛋白的溶解性和穩(wěn)定性,延長(zhǎng)半衰期,并通過(guò)其固有的結(jié)合特性進(jìn)行純化。4.轉(zhuǎn)鐵蛋白:轉(zhuǎn)鐵蛋白可以作為融合伴侶,利用其與鐵的高親和力進(jìn)行純化,并且有助于提高蛋白的穩(wěn)定性。5.XTEN聚合物:XTEN是一種柔性的多肽聚合物,可以提高蛋白的溶解性和穩(wěn)定性,有助于防止聚集。6.彈性蛋白樣多肽(ELP):ELP具有可逆的熱響應(yīng)性質(zhì),可以通過(guò)溫度誘導(dǎo)的相分離進(jìn)行純化,有助于提高純度。7.Strep標(biāo)簽:Strep標(biāo)簽是一個(gè)短肽序列,可以通過(guò)Strep-Tactin親和層析進(jìn)行高效率的純化。8.MBP融合蛋白:麥芽糖結(jié)合蛋白(MBP)可以作為融合伴侶,提高蛋白的溶解性,并通過(guò)親和層析進(jìn)行純化。。DL10000 DNA Marker的條帶清晰、亮度均勻,即使在高濃度的瓊脂糖凝膠中也能保持良好的分離效果。黑龍江漢遜酵母表達(dá)HPV VLP技術(shù)服務(wù)開(kāi)發(fā)
TaqPCRMasterMix的兼容性TaqPCRMasterMix對(duì)不同類(lèi)型的引物和模板具有良好的兼容性。無(wú)論是常規(guī)的DNA模板,還是經(jīng)過(guò)特殊處理的如甲基化修飾的模板,以及各種長(zhǎng)度和堿基組成的引物,都能在該Mix中發(fā)揮良好的擴(kuò)增效果。這使得它在多樣化的分子生物學(xué)研究中得以廣泛應(yīng)用,如在研究不同物種的基因差異時(shí),可輕松應(yīng)對(duì)各種復(fù)雜的模板和引物組合,拓寬了研究的范圍和深度。TaqPCRMasterMix的熒光染料特性含有熒光染料是該Mix的一大特色,在PCR反應(yīng)過(guò)程中,熒光染料能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物的積累情況,無(wú)需后續(xù)的電泳檢測(cè)等繁瑣步驟。隨著擴(kuò)增的進(jìn)行,熒光強(qiáng)度逐漸增強(qiáng),通過(guò)儀器可直接繪制出擴(kuò)增曲線(xiàn),實(shí)現(xiàn)對(duì)PCR過(guò)程的實(shí)時(shí)定量分析。在基因表達(dá)定量研究、SNP分析等方面,這種實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)功能極大地提高了實(shí)驗(yàn)的靈敏度和準(zhǔn)確性,同時(shí)減少了樣本處理過(guò)程中的污染風(fēng)險(xiǎn),為精細(xì)的分子生物學(xué)研究提供了有力手段。河北大腸桿菌表達(dá)VLP技術(shù)服務(wù)臨床前研究DL1000 DNA Marker是一種即用型的DNA分子量標(biāo)準(zhǔn),已預(yù)混Loading Buffer,可直接用于瓊脂糖凝膠電泳。
MOPS電泳緩沖液(10×, RNase free):高效、穩(wěn)定的RNA電泳解決方案在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,RNA電泳是分析RNA完整性、大小和純度的關(guān)鍵技術(shù)。然而,RNA的穩(wěn)定性較差,容易被RNase降解,因此RNA電泳中使用無(wú)RNase污染的緩沖液至關(guān)重要。MOPS電泳緩沖液(10×, RNase free)憑借其高效的緩沖能力和無(wú)RNase污染的特點(diǎn),成為RNA電泳的理想選擇。產(chǎn)品特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì)MOPS電泳緩沖液(10×, RNase free)是一種高濃度、無(wú)RNase污染的緩沖液,主要成分包括MOPS(3-嗎啉丙磺酸)、乙酸鈉和EDTA。這種配方能夠在電泳過(guò)程中提供穩(wěn)定的pH環(huán)境,確保RNA的完整性。無(wú)RNase污染:經(jīng)過(guò)特殊處理,確保無(wú)RNase污染,能夠有效保護(hù)RNA樣品免受降解。高效緩沖能力:MOPS緩沖液的pH值接近中性(pH 7.0-7.5),能夠在電泳過(guò)程中維持穩(wěn)定的pH環(huán)境,避免RNA降解。高分辨率:MOPS緩沖液具有較低的粘度和較高的緩沖能力,能夠有效提高電泳分辨率,確保RNA條帶清晰。濃縮設(shè)計(jì):10×的高濃度設(shè)計(jì)使得該緩沖液在使用時(shí)可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求靈活稀釋?zhuān)瑴p少浪費(fèi),降低實(shí)驗(yàn)成本。使用方法使用MOPS電泳緩沖液(10×, RNase free)時(shí),需按照以下步驟操作:配制1×工作液:根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,取適量的10×MOPS緩沖液,加入去離子水稀釋至1×工作液。
漢遜酵母在HPVVLPs表達(dá)中,優(yōu)化糖基化修飾以提高蛋白質(zhì)的活性和穩(wěn)定性主要可以從以下幾個(gè)方面進(jìn)行:1.選擇合適的表達(dá)載體和信號(hào)肽序列:使用分泌型表達(dá)載體可以促進(jìn)外源蛋白在漢遜酵母中的分泌表達(dá),同時(shí)選擇合適的信號(hào)肽序列可以引導(dǎo)蛋白質(zhì)正確定位和分泌,有助于完成糖基化等翻譯后加工過(guò)程。2.優(yōu)化培養(yǎng)條件:通過(guò)調(diào)整培養(yǎng)基的碳氮比、溫度、pH值等,可以影響漢遜酵母的生長(zhǎng)和外源基因的表達(dá),進(jìn)而可能影響糖基化修飾的效果。例如,某些維生素和氨基酸的添加可以提高細(xì)胞生長(zhǎng)和蛋白表達(dá)的效率。3.使用酶學(xué)方法進(jìn)行糖基化修飾的調(diào)控:通過(guò)使用化學(xué)或酶學(xué)方法對(duì)特定糖基化位點(diǎn)進(jìn)行切割或修飾,可以改善蛋白質(zhì)的糖基化模式,從而提高其穩(wěn)定性和活性。4.利用基因編輯技術(shù):通過(guò)CRISPR/Cas9等基因編輯技術(shù),對(duì)漢遜酵母中參與糖基化的基因進(jìn)行敲除或敲入,可以改變酵母的糖基化能力,從而優(yōu)化HPVVLPs的糖基化修飾。5.采用雜合共組裝技術(shù):通過(guò)分子生物學(xué)技術(shù)實(shí)現(xiàn)不同型別HPV衣殼蛋白的雜合共組裝,可以形成具有新的糖基化模式和改善的穩(wěn)定性的VLPs。Pfu Master Mix (2x)(With Dye)在定量PCR中的兼容性 預(yù)混染料可直接用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR,無(wú)需額外添加染料。
HPV病毒樣顆粒(Virus-LikeParticles,VLPs)表達(dá)服務(wù)技術(shù)是用于生產(chǎn)疫苗的關(guān)鍵技術(shù),它涉及到利用生物技術(shù)手段在宿主細(xì)胞中表達(dá)HPV的主要衣殼蛋白L1,這些蛋白能夠自組裝成具有病毒樣顆粒結(jié)構(gòu)的VLPs,從而用于疫苗制備。以下是畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)在表達(dá)HPVVLPs時(shí)的一些優(yōu)化策略:1.分子水平策略:通過(guò)分子水平的策略,如優(yōu)化密碼子使用,提高基因在畢赤酵母中的表達(dá)效率和蛋白質(zhì)構(gòu)象的正確性。2.信號(hào)肽篩選:選擇合適的信號(hào)肽以提高重組蛋白分泌到培養(yǎng)基中的效率,從而增加VLPs的產(chǎn)量。3.敲除蛋白酶基因:通過(guò)基因編輯技術(shù)敲除畢赤酵母中的蛋白酶基因,減少外源蛋白被降解的風(fēng)險(xiǎn)。4.共表達(dá)促折疊因子:共表達(dá)分子伴侶或促折疊因子,幫助正確折疊和組裝VLPs,提高其穩(wěn)定性和免疫原性。5.多拷貝數(shù)外源基因:使用多拷貝質(zhì)?;蚧蛘霞夹g(shù),提高外源基因的拷貝數(shù),增加蛋白表達(dá)量。6.發(fā)酵條件優(yōu)化:通過(guò)優(yōu)化發(fā)酵條件,如溫度、pH、碳源等,提高VLPs的表達(dá)量和質(zhì)量。7.基因編輯技術(shù):利用CRISPR/Cas9等基因編輯技術(shù)對(duì)畢赤酵母進(jìn)行遺傳改造,提高外源蛋白的表達(dá)。純化的蛋白質(zhì)可以進(jìn)行質(zhì)量分析和功能鑒定。遼寧漢遜酵母表達(dá)技術(shù)服務(wù)技術(shù)服務(wù)
Cre重組酶可以通過(guò)化學(xué)誘導(dǎo)劑(如他莫昔芬)進(jìn)行調(diào)控,實(shí)現(xiàn)基因表達(dá)的開(kāi)關(guān)控制。黑龍江漢遜酵母表達(dá)HPV VLP技術(shù)服務(wù)開(kāi)發(fā)
DL2000 II DNA Marker:精細(xì)的DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)DL2000 II DNA Marker 是一種即用型的DNA分子量標(biāo)準(zhǔn),廣應(yīng)用于瓊脂糖凝膠電泳中,用于估算DNA片段的大小。它由多條線(xiàn)狀雙鏈DNA片段組成,能夠?yàn)镈NA分析提供精確的分子量參考。產(chǎn)品特點(diǎn)組成:DL2000 II DNA Marker 由6條線(xiàn)狀雙鏈DNA片段組成,片段大小分別為100 bp、250 bp、500 bp、750 bp、1000 bp和2000 bp。即用型設(shè)計(jì):已預(yù)混1×Loading Buffer,使用時(shí)無(wú)需額外添加,直接上樣。清晰的條帶:電泳圖像清晰,背景干凈,條帶亮度均勻。穩(wěn)定性高:在室溫下可穩(wěn)定存放,長(zhǎng)期保存建議置于-20℃。使用方法上樣量:建議每次取5 μL直接加入瓊脂糖凝膠的加樣孔中。如果加樣孔較寬,可適當(dāng)增加上樣量。電泳條件:推薦使用1.0%-2.0%的瓊脂糖凝膠,1×TAE或0.5×TBE緩沖液,電壓5-10 V/cm。染色與觀(guān)察:電泳結(jié)束后,使用溴化乙錠(EB)或其他DNA染料染色,在紫外燈下觀(guān)察。注意事項(xiàng)保存條件:建議低溫保存,避免反復(fù)凍融。瓊脂糖質(zhì)量:電泳時(shí)應(yīng)盡量選用高質(zhì)量的瓊脂糖,以獲得比較好分離效果。電泳緩沖液:及時(shí)更換電泳緩沖液并使用新制備的凝膠,以免影響電泳結(jié)果。黑龍江漢遜酵母表達(dá)HPV VLP技術(shù)服務(wù)開(kāi)發(fā)